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雷尼替丁中N-亞硝基二甲胺(NDMA)的檢測 UPLC-MS/MS法

2019-11-08

? ? ? ? 2019年9月13日,美國FDA發布公告稱,多個品牌生產的雷尼替丁中含有低濃度的可能致癌物 N-亞硝基二甲胺(NDMA),該物質一般存在于水和食物中,在很低濃度時即可造成人體遺傳物質的損傷,具有致癌、致突變的特點。NDMA分子量小,親水性強,對檢測方法要求更加嚴格。


? ? ? ? 雷尼替丁,強效組胺H2受體拮抗劑,主要用于胃酸過多、燒心等的治療,也是目前比較主流的治療潰瘍病的藥品。在雷尼替丁中檢測出NDMA可能會對用藥安全性產生較大威脅,因此在藥物中準確監測NDMA非常重要。


? ? ? ? 針對此次“雷尼替丁”事件,迪馬科技結合中國食品藥品檢定研究院發布的《關于開展雷尼替丁中N-亞硝基二甲胺檢驗工作的通知》及FDA 10/17/2019公布最新檢測方案,建立了超高效液相色譜串聯三重四極桿質譜—鹽酸雷尼替丁中NDMA的檢測方法,本方法用于測定雷尼替丁藥物產品和原料藥中NDMA的含量,可供廣大分析工作者參考。

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? ? ? ? 以下為詳細解決方案,敬請參考!

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1、適用范圍
? ? ? ? 本方案適用于鹽酸雷尼替丁中N-亞硝基二甲胺(NDMA)的檢測。


2、標準品配制
(1) N-亞硝基二甲胺(NDMA)儲備液1.0 μg/mL:準確稱取適量標準品,用甲醇配制成1.0 μg/mL的儲備液;
(2) 對照品溶液2.0 ng/mL:吸取適量儲備液,用水配制成2.0 ng/mL對照品溶液;
(3) 靈敏度溶液1.0 ng/mL:吸取適量儲備液,用水配制成1.0 ng/mL靈敏度溶液。

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3、樣品制備
(1) 鹽酸雷尼替丁供試品溶液制備
??? 取供試品約300 mg,精密稱量于10 mL容量瓶中,用水定容至10 mL。

(2) 鹽酸雷尼替丁膠囊供試品溶液制備
取本品內容物適量(約相當于雷尼替丁300 mg)于15 mL離心管中,準確加入10 mL水,振蕩40 min,6000 rpm離心2 min,取上清液過微孔濾后上機分析。
(3) 鹽酸雷尼替丁片供試品溶液制備
取本品5片,精密稱量,研細,準確稱取細粉適量(約相當于雷尼替丁300 mg)于15 mL離心管中,加入10 mL水,振蕩40 min,6000 rpm離心2 min,取上清液過微孔濾膜后上機分析。


4、分析條件
UPLC 條件
色譜柱:Spursil C18, 100 x 3.0 mm, 3.0 μm (Cat#:82022)
流? 速:0.7 mL/min???
進樣量:10 μL??
柱? 溫:30 ℃
流動相:A: 0.1%甲酸水??? B: 0.1%甲酸甲醇
梯度設置

時間/Min.

0

1

3

3.5

7.5

A (%)

95

95

43

95

95

B (%)

5

5

57

5

5

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質譜條件

離子源:APCI源,正離子模式

檢測方式:多反應監測

NC電流:3 μA

霧化氣壓力:50 psi

離子源溫度:500 ℃

氣簾氣壓力:20 psi

碰撞氣CAD:8

定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表

藥物名稱

定性離子對

(m/z)

(母離子/子離子)

定量離子對

(m/z)

(母離子/子離子)

碰撞氣能量/eV

去簇電壓/V

N-亞硝基二甲胺

75.0/43.0

75.0/58.0

22

50

75.0/58.0

18

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5、實驗結果

(1) 重復性實驗結果
對照品溶液2.0 ng/mL重復進樣6次結果如下

對照品溶液重現性數據總結

數據名稱

峰面積

average

stdev

RSD

2.0 ng/mL-1

6590

6388.3

309.6

4.8%

2.0 ng/mL-2

6860

2.0 ng/mL-3

6330

2.0 ng/mL-4

6250

2.0 ng/mL-5

6350

2.0 ng/mL-6

5950

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6針NDMA 2.0 ng/mL的XIC對比圖

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(2) 靈敏度實驗
系統適用性靈敏度溶液1.0 ng/mL NDMA主峰信噪比>3。

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NDMA 1.0 ng/mL XIC圖
?

(3) 標準曲線
??? 用純水逐級稀釋NDMA儲備液,配制成1.0 ng/mL,2.0 ng/mL,5.0 ng/mL,10.0 ng/mL,50.0 ng/mL,100.0 ng/mL,500.0 ng/mL標準溶液。將標準溶液分別進樣,以峰面積對濃度做標準曲線,在線性范圍內線性良好,相關系數0.9998。

?

NDMA標準曲線圖

?

(4) 加標回收實驗
??? 取適量膠囊樣品(約相當于雷尼替丁300 mg),加入適量NDMA標準溶液,按照鹽酸雷尼替丁膠囊供試品溶液制備方法進行實驗。

鹽酸雷尼替丁膠囊中NDMA檢測的添加回收結果(%)

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(5) 陽性樣品實驗
??? 取適量樣品(約相當于雷尼替丁300 mg),按照鹽酸雷尼替丁膠囊供試品溶液制備方法進行實驗。空白實驗是樣品不取,直接加入水振蕩提取,然后上機。

鹽酸雷尼替丁膠囊中NDMA檢測結果

樣品名稱

批號

檢出濃度(ng/mL)

含量(ppm)

鹽酸雷尼替丁膠囊

6417013

10.1

0.34

鹽酸雷尼替丁膠囊

6419003

64.5

2.15


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鹽酸雷尼替丁膠囊中NDMA檢測XIC圖

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(6) NDMA和雷尼替丁分離度驗證實驗
??? 由于雷尼替丁保留較差,普通色譜柱上容易和NDMA共洗脫,把含有NDMA和雷尼替丁的混合標準溶液直接上機,本方法可將兩個化合物完全分離。


NDMA和雷尼替丁混標TIC圖(RT1.51? NDMA ,RT2.86? 雷尼替丁)

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NDMA XIC圖

?


雷尼替丁 XIC圖

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雷尼替丁中N-亞硝基二甲胺(NDMA)的檢測 相關產品信息:

貨號

名稱

規格

標準品

47747

N-亞硝基二甲胺(NDMA) [62-75-9]

1000 μg/mL 溶于甲醇 1 mL

色譜柱及保護柱

82022

Spursil C18 極性改性反相色譜柱

100 x 3.0 mm, 3.0 μm

HPLC溶劑·緩沖鹽

50102

甲醇 HPLC級

4 L

50144

甲酸 HPLC級

50 mL

通用色譜產品

52401B

瓶架/藍色

50孔

52401A

瓶架/白色

50孔

30039

FitMax針頭式過濾器 Nylon

13 mm, 0.22 μm 100/pk

30040

FitMax針頭式過濾器 Nylon

13 mm, 0.45 μm 100/pk

1034

樣品瓶(棕色/螺紋)

2 mL, 100/pk

1035

樣品瓶蓋/含墊(已經組裝)

100/pk

H80465

HPLC 進樣針

25 μL

紅色貨號產品火熱促銷中

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